www.8929.net > 酶切体系

酶切体系

在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的 选择非常重要,尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶,如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER,以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位点后,在...

体系不管多大,都有相应的buffer,只要将buffer变为1X工作浓度就行了,两个同时切的话,需要注意酶的量,看单位是多少,一般是1ul的酶切1ug的质粒或者其它DNA序列,尽量酶的体积不能超过体系的10%,因为里面含有甘油,可能会影响酶切效率。

AFLP(amplifiedfragment length polymorphism,扩增片段长度多态性)是由荷兰科学家Vos和Zabeau发明的一种十分有效的分子标记技术。其基本原理是:基因组DNA经两种限制性内切酶酶切,形成分子量大小不等的限制性酶切片段,然后把酶切片段与有共...

我们平时所用的酶试剂中都含有一定量的甘油,用量过多容易使酶产生星号活性,即限制性酶的特异性会受影响.

因为内切酶的酶活性单位定义是在50ul反应体系中,最适温度反应1小时能够讲1ugDNA完全酶切的酶量。所以,一般在酶切体系里,DNA的量是可以加到非常大的。因为考虑到后期的纯化后DNA的损失问题,所以推荐酶切体系中的DNA尽量多加一些。这样你纯化...

模板DNA 几百ng-几ug,区别不大 酶1 0.5ul 酶2 0.5ul buffer 去Takara产品目录查双酶切buffer表,按照那个倍数加,有时候需要BSA 水补足 20ul 30或37度,1-5小时都可以。有个别酶需要55度。 注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性。反应体...

做转化的时候,进行酶连接反应时,注意保持低温状态,因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见,一般连接3小时,16度;对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时,注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来。我的方法是培基高温消毒后放在烤箱...

同比例缩小即可。DNA的量是3.5微升。

看你的目的是什么,如果是为了做个酶切鉴定,10微升就足够了,如果是想回收片段,那体系就大点(当然了,要考虑DNA的浓度)。 一般做酶切,DNA回收实验,我一般用50微的体系,仅供参考。。。

首先是10×的缓冲液,配制20ul,则需要2ul缓冲液 其次是酶,一般用0.5-1ul,看具体的实验情况吧。 DNA的话,你做的是酶切鉴定还是酶切回收还是什么,这个会决定你所加的底物的量。 最后加水补齐20ul。

网站地图

All rights reserved Powered by www.8929.net

copyright ©right 2010-2021。
www.8929.net内容来自网络,如有侵犯请联系客服。zhit325@qq.com