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酶切体系

在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的 选择非常重要,尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶,如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER,以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位点后,在...

体系不管多大,都有相应的buffer,只要将buffer变为1X工作浓度就行了,两个同时切的话,需要注意酶的量,看单位是多少,一般是1ul的酶切1ug的质粒或者其它DNA序列,尽量酶的体积不能超过体系的10%,因为里面含有甘油,可能会影响酶切效率。

双酶切反应 (Double Digests) 1、同步双酶切 同步双酶切是一种省时省力的常用方法.选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步.NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NEBuffer,以保证100%的酶活性.NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活...

这个是看你用什么酶,一般购买的时候都会配有缓冲液和推荐用量的。质粒的浓度不要过高就行。如果没有完全切开,可以延长酶切的时间。

模板DNA 几百ng-几ug,区别不大 酶1 0.5ul 酶2 0.5ul buffer 去Takara产品目录查双酶切buffer表,按照那个倍数加,有时候需要BSA 水补足 20ul 30或37度,1-5小时都可以。有个别酶需要55度。 注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性。反应体...

我们平时所用的酶试剂中都含有一定量的甘油,用量过多容易使酶产生星号活性,即限制性酶的特异性会受影响.

1、如果你用的是Takara的酶,应该就只能分步了,而且BamHI还是30度反应,虽然也可以在37度切,但如果是分步切的话还是用30度吧。 2、为什么不用NEB的酶呢?可以用buffer1或2同时切(好像是,你需要自己再确认下),而且NEB的这两种酶都有HF酶,...

1. NEB 酶为限制性内切酶,对目的片段特异性序列进行识别与酶切; 2. Buffer的作用是维持反应体系的酸碱度的稳定。

AFLP(amplifiedfragment length polymorphism,扩增片段长度多态性)是由荷兰科学家Vos和Zabeau发明的一种十分有效的分子标记技术。其基本原理是:基因组DNA经两种限制性内切酶酶切,形成分子量大小不等的限制性酶切片段,然后把酶切片段与有共...

1.是2*10 2.分别是50/10=5,50/5=10,50/2=25。 一般来说几×就是对buffer稀释几倍。

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